Luminex Assays에 대한 Q&A 

 

 

1. Luminex 분석이란 무엇인가요? 

 

Luminex 분석은 하나의 샘플에서 여러 분석 물질을 정확하게 측정하는 일종의 면역 분석입니다. Luminex® xMAP® 기술은 최대 100개의 분석물질을 동시에 다중 검출할 수 있는 비드 기반 면역분석법입니다. 색상으로 구분된 microsphere 또는 bead는 고유한 스펙트럼 또는 비드 영역에 해당하는 다양한 비율의 적색 및 적외선 형광단으로 내부적으로 염색됩니다. 샘플에서 여러 사이토카인 및 기타 바이오마커의 정량화는 생물학적 과정 및 질병에 대한 중요한 정보를 제공합니다.

 

원하는 분석물에 특이적인 항체는 고유한 비드 영역에 결합되고 샘플과 함께 배양됩니다. 결합되지 않은 물질을 세척한 후, 샘플은 biotin화된 검출 항체 및 streptavidin-phycoerythrin (PE) 리포터의 혼합물과 함께 배양됩니다. Luminex 기기를 사용하여 red laser로 bead의 형광을 측정하고 green laser로 비드에 결합된 분석물의 양에 비례하는 PE 파생 신호의 크기를 결정합니다.

 

 


 

 

 

2. Luminex Assay를 이용하면 어떤 점이 좋은가요?

 

 Small Sample Volume - 소량의 샘플로 multiple analyte를 동시에 측정할 수 있습니다. 

 Save Time and Money. - multiple single-analyte ELISA kit을 이용하는 것 보다 비용을 훨씬 절감할 수 있습니다. 

 Flexibility – 연구 목적에 맞게 원하는 타겟을 선택할 수 있습니다. 

 Low Variability - 한번의 실험으로부터 도출된 multiple data point는 실험 변동성을 최소화 합니다. 

 

 

 

3. Luminex Assay Kit와 Luminex High Performance Assay Kit중 어떤 kit이 내 실험에 맞을까요? 

 

경제적이며 스크리닝 목적의 Multiplex kit을 찾으신다면 Luminex Assay가 적합하고, 더 낮은 농도를 측정할 수 있는 Multiplex kit을 찾으신다면 Luminex High Performance Assay가 적합합니다. 

 


 

 

 

4. R&D Systems Luminex® Assay protocol에 대해 알려주세요.

 

일반적인 실험 방법은 다음과 같습니다.

 

1) 지시에 따라 모든 시약을 준비합니다.

2) 각 웰에 50 μL의 standard / 샘플을 추가합니다.

3) 각 웰에 희석된 Microparticle Cocktail 50 μL을 추가합니다. 800rpm의 셰이커에서 RT에서 2시간 동안 배양합니다.

4) 각 웰에서 액체를 제거하고 100 μL 세척 버퍼로 채우고 액체를 다시 제거하여 세척합니다. 

5) 세척을 3회 수행합니다.

6) 희석된 Biotin-antibody cocktail 50 μL을 각 웰에 추가합니다.

7) 800rpm의 쉐이커에서 RT에서 1시간 동안 덮고 배양합니다.

8) 4단계에서와 같이 세척을 반복합니다.

9) 각 웰에서 액체를 제거하고 100 μL 세척 버퍼로 채우고 액체를 다시 제거하여 세척합니다. 

10) Luminex/MAGPIX Instrument를 사용하여 90분 이내에 판독합니다.

 

  

아래의 동영상에서 자세한 방법을 확인하실 수 있습니다.

 


 

 

5. Luminex High Performance Assay에 control이 제공되나요?

네, 각 panel에 specific한 control을 제공합니다. 

 

 

6. Luminex Performance 분석 결과는 Quantikine® ELISA 키트와 상관성이 있나요?

네, 상관성이 있습니다.

 

 

7. 여러 Luminex® Performance Assay Base Kit의 분석물을 결합하여 맞춤형 패널을 만들 수 있습니까?

아니요, Performance assay kit는 특정 panel내 analyte에 대한 standard curve를 제공합니다. 

 

 

8. Multiplex kit을 한번에 다 사용해야 하나요?

아니요, 사용하지 않은 plate 부분을 sealer로 덮어 두고, 차후에 부분적으로 실행하실 수 있습니다. 이미 사용된 plate well을 재사용하는 것은 오염의 우려가 있으므로 피해야 합니다.

 

 

9.얼마나 많은 샘플을 하나의 plate로 분석할 수 있나요?

각 Luminex multiplex kit은 96well plate로 제공되므로, standard와 sample을 duplicate로 실행한다면, 약 40개의 샘플을 하나의 plate로 분석할 수 있습니다.

 

 

10. 검출 한계(LOD)와 정량 하한(LLOQ)의 차이점은 무엇인가요?

검출 하한선(LOD)은 최소 검출 가능 용량(MDD)이라고도 합니다. 이 계산에서 얻은 값은 background와 구별될 수 있는 절대 최소값으로 간주됩니다. 정량화 하한(LLOQ)은 표준 곡선의 가장 낮은 지점입니다. 이 값은 샘플에서 정량화할 수 있는 가장 낮은 농도 값을 제공합니다. 가장 낮은 표준의 값 아래로 떨어지는 모든 샘플 값은 LLOQ 미만으로 보고되어야 합니다.

 

 

11. 분석을 맡길 수 있을까요?

네, 원하시는 타겟을 알려주시면 분석 후 결과값을 보내드립니다.

분석서비스 페이지를 참고해 주세요.